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荧光分光光度法在维生素B1含量测定上的应用

日期: 2022-06-08
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摘要: 维生素B1又名硫胺素,在植物性食物中分布极广,谷类种子表皮中含量更为丰富, 麦麸、酵母、米糠等均是维生素B1的良好来源。检测其含量也有着许多的方法。其中荧光分光光度法是对荧光物质进行定性和定量的有效方法,它是维生素B1含量测定的一个比较常用的方法。

本文以测定食品中维生素B1(硫胺素)元素含量为例,依据GB/T5009. 84-2003《食品中硫胺素(维生素B1 )的测定》,应用港东F-380型荧光分光光度计对维生素B1含量进行测定。结果证明此方法操作简便,线性良好是测定维生素B1含量的理想方法。


关键词: 荧光分光光度法 维生素B1硫胺素食品


 原理

硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成噻嘧色素,在紫外线照射下,噻嘧色素发出荧光。在给定的条件下,以及没有其他荧光物质干扰时,此荧光之强度与噻嘧色素量成正比,即与溶液中硫胺素量成正比。


 实验条件

仪器及附件:

天津港东 F-380 型荧光分光光度计

荧光石英比色皿


分析条件:

激发波长:365nm

发射波长:435nm


药品:

正丁醇、无水硫酸钠、淀粉酶、盐酸、乙酸钠、氯化钾 、氢氧化钠 、铁氰化钾 、乙酸 、硫胺素标准储备液(0.1mg/mL)等。


其它:

分析天平(0.0001g) 、容量瓶、盐基交换柱(填充活 性人造沸石) 、三角瓶、移液管、具塞比色管、擦镜纸、磁力搅拌器、pH计等。


样品及标准样品的制备

样品溶液的制备:

(1)样品提取

荧光分光光度法在维生素B1含量测定上的应用

(2)提取液净化

荧光分光光度法在维生素B1含量测定上的应用

(3)净化液氧化 (避光暗环境)

荧光分光光度法在维生素B1含量测定上的应用


标准溶液的制备:

(1)硫胺素标准储备液(0.1mg/mL):

精确称取100mg经氯化钙干燥24小时的硫胺素,溶于0.01mol/L盐酸中,稀释至1000mL。(于冰箱中避光保存)。 

(2)硫胺素标准中间液(10μg/mL):

取10mL硫胺素标准液,用0.01mol/L盐酸稀释至100mL于冰箱中避光保存。

(3)硫胺素标准使用液(0.1μg/mL):

将硫胺素标准中间液用水稀释用水稀释至100倍,用时现配。


标准曲线待测液

(1)标准溶液

将20mL硫胺素标准使用液(0.1μg/mL)加入交换柱以代替样品提取液,即得到标准净化液。(做三份)

(2)标准待测液

进行标准净化液的氧化过程,得到标准空白溶液A、标准溶液B(各三份,用作平行)。


  计算公式

荧光分光光度法在维生素B1含量测定上的应用

X——试样中硫胺素含量,单位为毫克每百克(mg/100g);

U——试样荧光强度;

Ub——试样空白荧光强度;

S——标准荧光强度 ;

Sb——标准空白荧光强度;

c——硫胺素标准使用液浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);

V——用于净化的硫胺素标准使用液体积,单位为毫升(mL);

V1——试样水解后定容之体积,单位为毫升(mL);

V2——试样用于净化的提取液体积,单位为毫升(mL);

m——试样质量,单位为克(g);

  ——试样含量由微克每克(μg/g)换算成毫克每百克(mg/100g)的系数


 测定结果

应用港东F-380型荧光分光光度计的“光度测定”模块,分别读取待测溶液的荧光强度,根据计算公式得到样品维生素B1 的含量。


 结论

采用荧光分光光度法测定维生素B1含量,操作简单,方法准确,是一种理想的方法。

由于维生素B1待测液遇光不稳定, 因此实验对仪器的功能要求高。港东F-380型荧光分光光度计率先在硬件上采用了激发侧挡光快门的设置,从而避免了样品被强光的直接照射,使整个实验操作简便,结果重现性良好。



This information is subject to change without notice.

© Tianjin Gangdong Sci&Tech.Development Co., 2011

Printed in CHINA, September 1, 2011


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